¿Cómo funciona la prueba de endotoxina bacteriana?

Las pruebas de endotoxina bacteriana generalmente implican el uso de reactivos que, cuando se mezclan en una solución con un posible contaminante, provocan una reacción, lo que significa la presencia de una endotoxina. Las pruebas cromogénicas, la prueba de coágulos de gel y las pruebas turbidimétricas son los métodos que los científicos emplean comúnmente para las pruebas de endotoxinas bacterianas. Los técnicos utilizan estos métodos de evaluación en una variedad de sustancias y objetos cuando verifican la contaminación por endotoxinas. El agua, las materias primas utilizadas en la fabricación de medicamentos, equipos y embalajes deben pasar todos los estándares de endotoxinas.

Las bacterias, hongos y virus tienen membranas protectoras exteriores que consisten en lipopolisacáridos, también conocidos como LPS. La porción lipídica de estas cadenas contiene endotoxinas. Estas sustancias generalmente permanecen dentro de la membrana pero se liberan durante el proceso de división celular y durante la destrucción o lisis celular. En los humanos, estas sustancias causan fiebre, coagulación anormal, shock séptico y otros síntomas, aunque a diferencia de las exotoxinas dentro de la célula, las endotoxinas no se convierten en un toxoide. En general, los microbiólogos verifican la presencia de endotoxinas asociadas con varias bacterias gramnegativas, incluida E. coli .

La prueba de coágulo de gel, o ensayo de lisado de ameboecitos de Limulus (LAL), implica el uso de un químico destructor de la membrana derivado de los amebocitos del cangrejo herradura, también conocido como Limulus polyphemus. Los técnicos observan una indicación positiva de endotoxinas si se produce coagulación o gelificación cuando el lisado se expone al objeto o sustancia en cuestión. Los microbiólogos suelen utilizar este método de prueba de endotoxinas bacterianas junto con pruebas cromogénicas y turbidimétricas para obtener resultados concluyentes.

La prueba de endotoxina bacteriana cromogénica utiliza un LAL especialmente tratado. Cuando este lisado entra en contacto con una endotoxina, la reacción produce un color específico. El proceso de prueba final incluye medir la turbidez o la turbidez de la solución. Los técnicos exponen la solución formada en la prueba de coágulo de gel a un espectrofotómetro, que emite un haz de luz. Al medir la pérdida de intensidad de luz en el haz a medida que pasa a través de la solución, los microbiólogos pueden determinar si una endotoxina está presente o no.

Los asociados de laboratorio generalmente completan estas tres pruebas de endotoxinas bacterianas dos o tres veces para garantizar resultados precisos. La prueba de gel no se utiliza exclusivamente ya que su límite más bajo de detección es de 0,03 unidades de Ehrlich por mililitro (UE / ml). Las pruebas cromogénicas y turbidimétricas detectan endotoxinas en el rango de 0.005 EU / ml. Los parámetros de seguridad difieren mucho según la sustancia que se prueba. Mientras que el agua estéril utilizada para inyección o riego puede contener no más de 0.25 EU / ml, el agua estéril para inhalación puede contener hasta 0.5 EU / ml.

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