Como o teste de endotoxina bacteriana funciona?

O teste de endotoxina bacteriana geralmente envolve o uso de reagentes que, quando misturados em uma solução com um possível contaminante, causam uma reação, significando a presença de uma endotoxina. Testes cromogênicos, testes de coágulo de gel e testes turbidimétricos são os métodos que os cientistas comumente empregam para testes de endotoxinas bacterianas. Os técnicos usam esses métodos de avaliação em uma variedade de substâncias e objetos ao verificar a contaminação por endotoxinas. A água, as matérias-primas usadas na fabricação de medicamentos, equipamentos e embalagens, devem passar todos os padrões de endotoxina.

Bactérias, fungos e vírus têm membranas externas protetoras consistindo em lipopolissacarídeos, também chamados de LPS. A porção lipídica dessas cadeias contém endotoxinas. Essas substâncias geralmente permanecem dentro da membrana, mas são liberadas durante o processo de divisão celular e durante a destruição ou lise celular. Nos seres humanos, essas substâncias causam febre, coagulação anormal, choque séptico e outros sintomas, embora, diferentemente das exotoxinas na célula, as endotoxinas não se convertam em toxóides. Geralmente, os microbiologistas verificam a presença de endotoxinas associadas a várias bactérias gram-negativas, incluindo E. coli .

O teste de coágulo de gel, ou ensaio de lisado de ameboecito de Limulus (LAL), envolve o uso de um produto químico destruidor de membrana derivado dos amebócitos do caranguejo-ferradura, também conhecido como Limulus polyphemus. Os técnicos observam uma indicação positiva de endotoxinas se ocorrer coagulação ou gelificação quando o lisado é exposto ao objeto ou substância em questão. Os microbiologistas geralmente usam esse método de teste de endotoxina bacteriana em conjunto com testes cromogênicos e turbidimétricos para obter resultados conclusivos.

O teste de endotoxina bacteriana cromogênica utiliza um LAL especialmente tratado. Quando esse lisado entra em contato com uma endotoxina, a reação produz uma cor específica. O processo final de teste inclui a medição da turbidez ou nebulosidade da solução. Os técnicos expõem a solução formada no teste de coágulo de gel a um espectrofotômetro, que emite um feixe de luz. Medindo a perda de intensidade da luz no feixe que passa pela solução, os microbiologistas podem determinar se uma endotoxina está presente ou não.

Os funcionários do laboratório geralmente concluem esses três testes de endotoxina bacteriana duas ou três vezes para garantir resultados precisos. O teste de gel não é utilizado exclusivamente, pois o seu limite mais baixo de detecção é de 0,03 unidades Ehrlich por mililitro (EU / ml). Os testes cromogênicos e turbidimétricos detectam endotoxinas na faixa de 0,005 EU / ml. Os parâmetros de segurança diferem muito, dependendo da substância que está sendo testada. Embora a água estéril usada para fins de injeção ou irrigação não possa conter mais do que 0,25 UE / ml, a água estéril para fins de inalação pode conter até 0,5 UE / ml.

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